Инкубационная смесь для ПЦР
Инкубационная смесь содержит буферный раствор, препарат фрагментирован-ной ДНК, дезоксирибонуклеозидтрифосфаты, ДНК-полимеразу и две разные затравки.
В ПЦР используется ДНК-полимераза из термофильной бактерии Thermns aqnaticus (Taq-полимераза), обитающей в природных горячих источниках. Этот фермент отличается высокой устойчивостью к повышенной температуре.
- Инкубационная смесь.
Если ДНК человека разрезать с помощью рестриктаз на фрагменты длиной 2000 нуклеотидов (это близко к среднему размеру генов), то получится около 2 млн фрагментов. Найти в такой груде изучаемый ген можно, используя специальные затравки. Затравки представляют собой фрагменты одноцепочечной ДНК длиной около 20 нуклеотидов. Нуклеотидная последовательность одной затравки должна быть комплементарна З'-концу одной цепи искомой последовательности ДНК, а второй затравки — З'-концу другой цепи этой последовательности. Затравки в ПЦР функционируют как собственно затравки, а главное — как зонды, обнаруживающие и метящие изучаемую последовательность в молекуле ДНК. Если ставится задача поиска гена белка, то такие затравки можно синтезировать, исходя из генетического кода и аминокислотной последовательности N- и С-концов белка. Эти затравки найдут в массе фрагментов суммарной ДНК тот фрагмент, который содержит искомый ген, а ДНК-полимераза синтезирует новые копии гена.
Ключевые слова: человек