Методы изучения ДНК
Для выделения ДНК из экстракта тканей белки экстракта разрушают протеаза-ми, ДНК осаждают этанолом и осадок растворяют в буферном растворе. Как уже отмечалось, молекулы ДНК имеют очень большие размеры: молекула среднего размера из клеток человека содержит примерно 150 млн нуклеотидных пар, ее длина равна 4 см, отношение длины к толщине равно 3106 (толщина двойной спирали ДНК 20 нм).
Такие молекулы очень чувствительны к сдвиговым усилиям, возникающим в растворе, поэтому в процессе выделения из тканей ДНК фрагментирует-ся, и получаются молекулы размером в тысячи-десятки тысяч нуклеотидных пар. Таким образом, каждая молекула среднего размера распадается на 15 000-150 000 фрагментов. Но и такого размера молекулы неудобны для исследования, и их приходится фрагментировать дополнительно.Для фрагментирования ДНК обычно используют ферменты рестриктазы, выделяемые из бактерий. В отличие от других ДНКаз, рестриктазы узнают определенную нуклеотидную последовательность в двухцепочечной молекуле ДНК, часто из четырех или шести нуклеотидных пар, присоединяются к ней и гидролизуют по одной 3',5'-фосфодиэфирной связи в каждой из цепей в области этих последовательностей. Разные рестриктазы узнают разные последовательности (рис. 3.10), и с помощью набора рестриктаз можно разрезать молекулу ДНК на фрагменты желаемой длины и в местах, выбранных экспериментатором.
Ключевые слова: ферменты, человек